做western处理蛋白时煮过头了会蛋白降解吗

问题描述

精选答案

western blot样品煮蛋白后结块是经常会有现象如果是SDS-PAGE，加了上样缓冲液后依然煮蛋白后结块，那说明蛋白样品浓度过高，已经超出了SDS可以结合的浓度。建议降低样品的浓度即可如果没有加含有SDS的上样缓冲液，那么就是蛋白样品被煮沸后变性沉淀了。加入溶解剂即可

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插画学习

煮沸时间不够使得蛋白质变性不充分或者形成二聚体会导致实验效果不好，煮过头的情况我也没有遇到过（貌似还没有碰到人煮个5-10分钟还会煮成一小时的- -

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小李说税务

），不过肯定的是变性已经充分。可以试一试，当然也有可能蛋白质长时间高温沸水作用下部分降解。