从大肠杆菌提出来的质粒如何扩繁

问题描述

精选答案

首先，你的质粒必须是穿梭质粒，否则不可能转的。

如果是穿梭质粒的话，提取出来直接转化感受态的农杆菌就好。

步骤：

农杆菌感受态细胞的制备

1.挑取少许农杆菌，接种于5ml LB液体培养基 (含50mg/L STR)中，28℃、200r/mim培养过夜。

2.取2ml培养物于LB液体培养基 (含50mg/L STR) 中继续培养，直至OD800 为0.5左右。

3.将培养物置冰浴中30min，4℃、5000r/min、离心5min，弃去上清液。

4.用10ml冷的0.1mol/L NaCl悬浮菌液。

5.4℃、5000r/min，离心5min，弃去上清液。

6.用1ml冷的CaCl2 (20mmol/L)悬浮，分装成50μl／管，液氮中冷冻后至-80℃保存

不是穿梭载体。