dna分光光度法原理

问题描述

精选答案

DNA在260nm处吸收强烈，OD260值为1的溶液相当于大约50μg/mL双链DNA，而蛋白质的特征吸收在280nm处，测定DNA提取物中260nm处和280nm处的吸收值OD260和OD280，可大致判断所提取的DNA的纯度。OD260/OD280的值在1.7~1.9之间，说明提纯度较好，低于1.7，说明提取的DNA中残留有较多的蛋白质，可用酚、氯仿继续抽提；若大于2.0，说明有RNA污染或DNA链断裂。提取的DNA量可用下式计算：

P=cV

式中，c为DNA浓度，单位为μg/mL；V为提取的DNA溶液的体积，单位为mL。

如提取的DNA样品为2mL，进行OD260值测定的检测样品为0.1mL+0.9mL TE缓冲液=1mL，DNA的稀释倍数=1mL/0.1mL=10倍，OD260和OD280值分别为0.63和0.35，则：

纯度= OD260/OD280=1.8。

样品中DNA浓度c=50μg/mL * OD260 * 稀释倍数=50μg/mL * 0.63 * 10 =315μg/mL

提取得到的DNA样品量是：P=315μg/mL * 2mL =0.630mg。

其他回答

心理学与生活

原理是,不同浓度的 DNA 溶液对 260 纳米波长的紫外光的吸光度成线形关系,可以 通过作标准曲线的方法计算。 使用的单位是一般是微克/微升。

分光光度法不但能够确定核酸的浓度, 还可以通过测定在 260nm 和 280nm 的紫外线吸收 值的比值(A260/A280)估计核酸的纯度。