检测基因是否表达成功的方法

问题描述

精选答案

主要用探针检测mRNA或用抗体检测出表达的蛋白质(转录水平上对特异mRNA的检测和翻译水平上对特异蛋白质的检测)

详见下面:

外源基因转录水平的鉴定

基因表达分为转录及翻译两阶段，转录是以DNA（基因）为模板生成mRNA的过程，翻译是以mRNA为模板生成蛋白质的过程，检测外源基因的表达就是检测特异mRNA及特异蛋白质的生成。所以基因表达检测分为两个水平：即转录水平上对特异mRNA的检测和翻译水平上对特异蛋白质的检测。转录水平上的检测主要方法是Northern杂交，它是以DNA或RNA为探针，检测RNA链。和Southern杂交相同，Northern杂交包括斑点杂交和印迹杂交。

也可用RT-PCR（reverse transcribed PCR）方法检测外源DNA在植物体内的转录表达。其原理是以植物总RNA或mRNA为模板进行反转录，然后再经PCR扩增。如果从细胞总RNA提取物中得到特异的cDNA扩增条带，则表明外源基因实现了转录。此法简单、快速，但对外源基因转录的最后决定，还需与Northern杂交的实验结果结合。

外源基因表达蛋白的检测

表达蛋白的检测方法有三种：

①生化反应检测法：主要通过酶反应来检测；②免疫学检测法：通过目的蛋白（抗原）与其抗体的特异性结合进行检测，具体方法有Western杂交、酶联免疫吸附法（ELISA）及免疫沉淀法；③生物学活性的检测。

Western杂交是将聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳分离抗原（Antigen）固定在固体支持物上（如硝酸纤维素膜，NC膜）。不同分子量大小的蛋白质在凝胶中迁移率不同，据此可确定特定的抗原存在与否以及相对丰度，或者蛋白质是否遭到降解等。蛋白质电泳后转到NC膜，放在蛋白质（如牛血清蛋白BSA）或奶粉溶液中，温育，以封闭非特异性位点，然后用含有放射性标记或酶标记的特定抗体杂交，抗原-抗体结合，再通过放射性自显影或显色观察。

其他回答

英语口语宝强哥

有多种。

以下是其中几种常见的方法：

1. 分子生物学方法：通过RT-PCR、Northern blot、Western blot等技术检测基因的转录和翻译产物，从而判断基因是否表达成功。

2. 生物化学方法：通过检测细胞或组织中是否存在基因表达的蛋白质或其他产物，来确定基因是否表达成功。

3. 免疫学方法：通过特异性抗体检测细胞或组织中是否存在基因表达的蛋白质，从而判断基因是否表达成功。

4. 生物学方法：通过观察细胞或组织的表型变化，推断基因是否表达成功，比如观察细胞分化、形态学变化等。总的来说，应根据具体实验条件和目的选择适合的方法来检测基因是否表达成功。