为什么要用两种限制酶切割质粒正接反接

问题描述

精选答案

用两种限制酶切割可以保证和目的基因正接，从而避免反向连接，因为反向连接目的基因不能正常表达。

用两种不同的限制酶分别切割质粒和目的基因，既可以形成重组质粒又可以避免质粒的自身环化和反向连接。

打个比方,目的基因原本正确顺序为ATGCGT,目的基因反向链接TGCGTA了,完全反向颠倒链接了。

反向链接,造成序列完全改变,后果是基因无法表达,翻译不出来来蛋白质,或者不是原来想要的蛋白质等后果。

通常采用双酶切手段来产生不同的黏性末端,可以避免造成基因反向链接。