如何查询一个蛋白的n端朝向哪里

问题描述

精选答案

新发现一个细胞膜蛋白，通过序列分析发现是一个多次跨膜蛋白。

为了确定跨膜次数及其末端朝向，你在细胞内高表达了该蛋白，然后通过免疫荧光术去标记细胞。当你用抗N端抗体直接标记活细胞时，出现膜上荧光，而用抗C端抗体时却没有。用甲醇固定细胞（此时细胞膜被破坏）后，则两种抗体都出现膜上荧光标记。将细胞膜分离纯化，然后用蛋白酶充分降解膜外部分，再经SDS-PAGE和银染，发现有10条主带，其中三条在对照细胞（即仅转染了空质粒载体的细胞）的相应样品中也有。如果先用蛋白酶处理，再分离细胞膜，那么，你会发现6条主带，而对照样品有其中的两条。