0.3M盐酸胍用95%乙醇怎么配置

问题描述

精选答案

蛋白质的提取

准备试剂：异丙醇含0.3M盐酸胍的95%乙醇无水乙醇1%SDS。

操作步骤：

1.取沉淀DNA后剩余的上清，用异丙醇沉淀蛋白质。每使用1ml TRIzol加1.5ml异丙醇，室温放置10分钟，2～8℃12000×g离心10分钟弃上清。

2.用含0.3M盐酸胍的95%乙醇洗涤蛋白质沉淀。每使用1mlTRIzol加2ml洗涤液，室温放置20分钟，2～8℃7500×g离心5分钟，弃上清，重复两次。用2ml无水乙醇同样方法再洗一次。

3.真空抽干蛋白质沉淀5～10分钟，用1%SDS溶解蛋白质，反复吸打，50℃温浴使其完全溶解，不溶物2～8℃10000×g离心10分钟除去。分离得到的蛋白质样品可用于Western Blot或-5至-20℃保存备用。

注意事项：

1.蛋白质沉淀可保存在含0.3M盐酸胍的95%乙醇或无水乙醇中2～8℃一个月以上或-5至-20℃一年以上。

2.用0.1% SDS在2～8℃透析三次，10000×g离心10分钟取上清即可用于Western Blot。

常见问题分析：

得率低：

A.样品裂解或匀浆处理不彻底。

B.最后得到的蛋白质沉淀未完全溶解。

蛋白质降解：组织取出后没有马上处理或冷冻。

电泳时条带变形：蛋白质沉淀洗涤不充分。