PCR失败或扩增条带不理想的原因有哪些

问题描述

精选答案

可能的原因和对应的解决方案如下：

1. 引物用量偏大，引物的特异性不高。应调换引物或降低引物的使用量。

2. 循环的次数过多。适当增加模板的量，减少循环次数。

3. 酶的用量偏高或酶的质量不好，应降低酶量或调换另一来源的酶。

4. 退火温度偏低，退火及延伸时间偏长。应提高退火温度，减少变性与延伸时间，也可采用二种温度的 pcr 扩增。以 2 度为梯度设计梯度 PCR 反应优化退火温度。

5. 样品处理不当。

6. Mg2+ 浓度偏高，因适当调整 Mg2+ 使用浓度。

7. 若为 PCR试剂盒，也可能时试剂盒本身质量有问题。推荐使用engreen的PCR试剂盒，添加改良的DNA聚合酶，大大提高扩增产物的特异性和保真性。

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