生物凝胶色谱柱的装填中为什么要加缓冲液

问题描述

精选答案

1色谱分析过程中，缓冲液是不可或缺的，因为要用它来调节流动相的pH值，凝胶色谱柱装填完后要立即用缓冲液充分洗涤，主要目的是洗涤平衡，使凝胶装填均匀紧密。

2.洗涤平衡就是保持PH值稳定在某个区间

3.缓冲盐使用不当，会造成一些不良影响，如，色谱柱压升高、柱效下降、保留时间异常等等不良影响：

1.柱压升高；

原因：缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出，堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙，阻碍流动相传质，引起柱压升高。

2.相同化合物的保留时间发生变化；

原因：如果没有冲洗干净就进行进样，色谱柱内含有的盐会使化合物的保留时间发生变化.

3.柱效下降；

原因：有些缓冲盐会渗入到键合相的深处，损害硅胶基体，导致色谱柱键合相流失，柱床变松，柱效下降；凝结在键合相表面，使C18碳链难以舒展，对物质的保留能力下降，导致柱效下降。因此用过缓冲盐后需要对色谱柱进行冲洗，水中缓冲盐浓度较大时应特别引起注意。

其他回答

无量药师

加缓存液是为了洗涤平衡，使凝胶装填均匀紧密。洗涤平衡是为了尽量减少除样品本身特性因素外其他因素的影响，比如pH、温度、缓冲液等